αENaC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401123-ACT

SCNN1Aは、上皮性ナトリウムチャネル（ENaC）のαサブユニット（αENaC）をコードしており、極性をもつ上皮における頂端膜側からのNa⁺流入を規定する主要因子です。αENaCはβおよびγのENaCサブユニットとともに、上皮を介したナトリウム吸収と、それに伴う浸透圧依存的な水移動を支え、気道表面液の恒常性、腎臓でのナトリウム取り扱い、ならびに上皮バリアの生理に影響します。ENaC活性は、プロテアーゼによる切断処理と、NEDD4L経路を介したユビキチン依存的な分解・ターンオーバーによって厳密に制御されており、アルドステロン／MRシグナルや膜脂質組成からの情報を統合します。SCNN1Aの発現変化やENaC制御の異常は、塩・体液バランスの障害と関連し、嚢胞性線維症に関連する気道脱水の表現型や、血圧調節に影響する単一遺伝子性症候群などに結び付けられています。

αENaC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCNN1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

αENaC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCNN1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCNN1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性αENaCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCNN1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるαENaC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCNN1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるαENaC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。