α-actinin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-430958-KO-2

Panoramica

Actn1 codifica l’α-actinina-1, una proteina legante l’actina insensibile al Ca2+ che reticola l’actina filamentosa e organizza le reti di actina corticali, le fibre di stress e le strutture citoscheletriche associate alle adesioni. Nelle cellule murine, l’α-actinina-1 sostiene la dinamica delle adesioni focali collegate alle integrine, la meccanotrasduzione e la migrazione cellulare coordinando il rimodellamento dell’actina con hub di segnalazione quali le GTPasi della famiglia Rho. Grazie al suo ruolo nel mantenimento della tensione citoscheletrica e della stabilità di membrana, ACTN1 è rilevante negli studi sulla biogenesi piastrinica e sulla funzione emostatica, in cui un’architettura dell’actina alterata può compromettere la formazione dei proplatelet e la resilienza del citoscheletro. Una funzione deregolata dell’α-actinina-1 è stata associata a disordini piastrinici ereditari e a fenotipi più ampi che coinvolgono adesione e architettura tissutale, rendendo Actn1 un bersaglio utile per modellare meccanismi di malattia guidati dal citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-1 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actn1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actn1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actn1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-actinin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actn1 per lo studio della segnalazione di α-actinin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actn1 critici per la funzione di α-actinin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actn1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actn1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-actinin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-actinin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actn1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actn1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.