α3e Tubulin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400023-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- α3e Tubulin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- α3e Tubulinダブルニカースプラスミド（h）およびα3e Tubulinダブルニカースプラスミド（h2）は、TUBA3Eを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
α3e Tubulin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400023-NIC | 20 µg | $410.00 |
TUBA3E は、微小管のβチューブリン結合サブユニットである α3e チューブリンをコードしており、細胞骨格の構築、細胞内輸送、有糸分裂紡錘体の編成を支えます。チューブリン重合体の中核構成要素として、α3e チューブリンは、細胞周期の進行、神経突起の伸長、極性をもった輸送（ポーラライズド・トラフィッキング）の基盤となる微小管ダイナミクスに寄与します。チューブリンアイソタイプの発現や微小管安定性の乱れは、染色体分配や細胞運動性を変化させ得ますが、これらの過程はゲノム不安定性や腫瘍生物学としばしば関連づけられています。そのため TUBA3E は、細胞骨格リモデリング、有糸分裂、ならびに微小管標的化化合物に対するストレス応答に結び付く経路の中で研究されています。
α3e Tubulin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUBA3E 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUBA3E内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUBA3Eの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUBA3Eが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。