α1b Tubulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400021-ACT

TUBA1Bはヒトα1bチューブリンをコードしており、βチューブリンとヘテロ二量体を形成して微小管を構築する主要なαチューブリンアイソタイプの一つである。微小管は細胞内輸送、細胞極性の維持、そして有糸分裂紡錘体の形成に不可欠な構造的支持を担う。微小管の動的な再編成は、微小管関連タンパク質やチューブリンの翻訳後修飾による協調的な制御を介して、小胞輸送、繊毛形成、染色体分配などの過程を調節する。チューブリン恒常性の破綻は、細胞骨格の組織化、細胞周期の進行、ストレス応答を変化させ得ることから、チューブリン生物学は増殖シグナルや細胞の適応機構とも関連する。広く発現する細胞骨格成分として、α1bチューブリンは、がん細胞の挙動や神経発生生物学に関わる微小管ダイナミクスおよび細胞骨格依存性表現型の研究にしばしば用いられる。

α1b Tubulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUBA1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

α1b Tubulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUBA1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUBA1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性α1b Tubulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUBA1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるα1b Tubulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUBA1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるα1b Tubulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。