ZNF831 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414334-ACT

ZNF831（zinc finger protein 831）は、免疫細胞の機能や分化を形づくる遺伝子発現プログラムの制御に関与するとされる、ヒトのC2H2型ジンクフィンガー転写因子です。転写制御やクロマチン関連過程に関わり、サイトカインシグナル伝達やリンパ球活性化に影響を与えることで、適応免疫応答を司るより広範な経路と統合的に作用します。遺伝学的研究では、ZNF831近傍の変異が免疫関連形質や自己免疫疾患の感受性と関連することが示されており、炎症性表現型の背景にある制御ネットワークを解析する上での重要性が支持されています。核内のDNA結合タンパク質として、ZNF831は造血系および免疫系のモデルシステムにおける転写回路や遺伝子制御アーキテクチャを検討するための有用な手がかりとなります。

ZNF831 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF831の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZNF831 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF831 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF831転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZNF831の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF831遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZNF831依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF831発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZNF831経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。