ZNF750 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408278-ACT

ZNF750 codifica um fator de transcrição do tipo dedo de zinco que atua como um regulador-chave do comprometimento de linhagem epitelial e da diferenciação terminal, com papéis de destaque na maturação de queratinócitos e na homeostase do epitélio estratificado. Ele modula programas transcricionais ligados à formação da barreira epidérmica, à saída do ciclo celular e à repressão de estados semelhantes aos de progenitores, por meio do controle coordenado de redes gênicas associadas à diferenciação. A perturbação da expressão de ZNF750 tem sido associada à diferenciação epitelial desregulada e a alterações no comportamento proliferativo, o que o torna relevante para estudos de biologia do epitélio escamoso e de mecanismos de doenças relacionadas. Como proteína nuclear de ligação ao DNA, o ZNF750 oferece um ponto de intervenção acessível para dissecar os circuitos transcricionais que governam a expressão gênica específica de tecidos.

ZNF750 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF750 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF750 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF750 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF750, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF750. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF750 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF750 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF750 em células tumorais com expressão de ZNF750 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.