ZNF326 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404968-ACT

ZNF326 codifica uma proteína nuclear contendo dedos de zinco, implicada na regulação da transcrição e no processamento de RNA, com funções descritas na coordenação do splicing co-transcricional e de programas de expressão gênica que sustentam a manutenção do estado celular. Como um fator associado à cromatina, ZNF326 pode influenciar a arquitetura regulatória próxima ao promotor e o acoplamento entre a transcrição e a maturação do pré‑mRNA, vinculando-se a vias que governam proliferação, diferenciação e expressão gênica adaptativa ao estresse. A expressão ou atividade desregulada de ZNF326 tem sido associada na literatura a redes transcricionais alteradas na biologia do câncer e em outros contextos em que um metabolismo de RNA aberrante contribui para fenótipos de doença. Essas características tornam ZNF326 um alvo útil para estudos mecanísticos do crosstalk entre transcrição e splicing e de reconfiguração de redes regulatórias.

ZNF326 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF326 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF326 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF326 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF326, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF326. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF326 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF326 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF326 em células tumorais com expressão de ZNF326 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.