ZEB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400201-ACT

ヒトZEB1は、亜鉛フィンガーE-box結合ホメオボックス蛋白質ZEBをコードする。ZEBは配列特異的な転写因子であり、E-box様モチーフに結合して、上皮間葉転換（EMT）、細胞極性、分化を制御する遺伝子制御プログラムの統合を担う。ZEB1はTGF-β/SMAD、Wnt/β-カテニン、Notch、MAPK経路からのシグナルを統合し、miR-200ファミリーなどのマイクロRNAネットワークとも連携して、転写抑制および転写活性化を調節する。ZEB1活性の変化は、細胞接着、運動性、系譜可塑性の変動としばしば関連し、線維化、発生異常、腫瘍生物学の研究において重要である。EMT関連の転写状態を司る中枢的制御因子として、ZEB1は状況依存的な遺伝子発現プログラムを解析するための分子ノードとして広く利用されている。

ZEB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZEB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZEB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZEB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZEB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZEB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZEB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZEB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZEB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZEB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。