XBP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423727-LAC

Xbp1 codifica XBP1, un fattore di trascrizione della famiglia bZIP (basic leucine zipper) che rappresenta un effettore centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) durante lo stress del reticolo endoplasmatico. In seguito allo splicing mediato da IRE1, XBP1 attivo programma reti trascrizionali che aumentano la capacità di folding dell’ER, regolano la degradazione associata all’ER e rimodellano il percorso secretorio e i processi di biosintesi lipidica. Nei modelli murini, l’attività di XBP1 orienta la differenziazione e la funzione di tipi cellulari altamente secretori e integra segnali metabolici e infiammatori attraverso le vie di stress dell’ER. La deregolazione della segnalazione di XBP1 è ampiamente utilizzata come punto d’ingresso meccanicistico per studiare gli squilibri della proteostasi, l’adattamento delle cellule immunitarie e modelli di patologie legate allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale XBP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Xbp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale XBP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Xbp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di XBP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Xbp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.