WTAP Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425635-LAC

Mouse Wtap codifica WTAP, un componente regolatorio centrale del complesso metiltransferasico dell’RNA m6A che coopera con METTL3/METTL14 per controllare la deposizione di N6‑metiladenosina su mRNA e lncRNA. WTAP contribuisce a coordinare la lavorazione co-trascrizionale dell’RNA, inclusi lo splicing alternativo, la stabilità dell’mRNA, l’esportazione nucleare e la traduzione, modellando così la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e le risposte allo stress. Attraverso il suo ruolo nella regolazione epitranscrittomica, WTAP influenza vie associate al mantenimento delle cellule staminali e alla specificazione di linea ed è stato collegato a fenotipi proliferativi e di sviluppo deregolati in modelli rilevanti per la malattia. Alterazioni della patterning m6A dipendente da WTAP possono rimodellare l’output del trascrittoma e le reti di espressione proteica, rendendo Wtap un nodo utile per indagare il metabolismo dell’RNA e il controllo dell’espressione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale WTAP (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Wtap in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale WTAP (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Wtap, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di WTAP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Wtap e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.