WT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400095-NIC

WT1 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola la specificazione di linea, il controllo del ciclo cellulare e l’apoptosi attraverso un’attivazione o repressione trascrizionale dipendente dal contesto. Opera in programmi di sviluppo, in particolare nei tessuti urogenitali ed ematopoietici, e interagisce con vie che controllano la differenziazione e la plasticità epitelio-mesenchimale modulando reti di fattori di crescita e circuiti trascrizionali. WT1 partecipa anche al processamento dell’RNA tramite effetti specifici di isoforma sullo splicing e sul legame con gli acidi nucleici, contribuendo a esiti regolatori complessi. Un’espressione deregolata di WT1 o sue mutazioni sono implicate in molteplici neoplasie e disturbi dello sviluppo, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico negli studi sui circuiti trascrizionali oncogenici e sulla regolazione del destino cellulare.

WT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.