Wnt-7a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423721

Panoramica

Wnt7a codifica il ligando secreto Wnt-7a, un regolatore chiave della segnalazione Wnt che influenza sia la trascrizione dipendente da β-catenina sia gli output delle vie non canoniche che controllano la dinamica del citoscheletro e la polarità planare delle cellule. Nei tessuti murini, Wnt-7a contribuisce al patterning embrionale e all’organogenesi e aiuta a coordinare la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e la migrazione attraverso l’interazione con i recettori Frizzled/LRP. Un’attività alterata di Wnt7a è spesso studiata in contesti di programmi di sviluppo aberranti e di omeostasi tissutale deregolata, in cui il “tono” della via Wnt e i circuiti di feedback modellano gli stati di espressione genica. In quanto nodo di via con ampi effetti a valle, Wnt-7a è comunemente indagato per i suoi ruoli nella morfogenesi, nel comportamento di cellule staminali/progenitrici e nel rimodellamento dell’architettura tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-7a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt7a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt7a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt7a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-7a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt7a per lo studio della segnalazione di Wnt-7a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt7a critici per la funzione di Wnt-7a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt7a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-7a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-7a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt7a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-7a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-7a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt7a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt7a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.