Wnt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423717

概要

Wnt4は、分泌型シグナルリガンドであるWnt-4をコードしており、胚発生および成体組織の恒常性を形作るWNT経路活性の主要な制御因子です。マウスでは、Wnt-4は状況依存的にカノニカルなβカテニンシグナル伝達および非カノニカルWNT経路を活性化することで、細胞運命決定、極性、遊走、分化に影響を与えます。また、生殖路および腎臓の形態形成、骨形成および間質プログラム、さらに下流の転写・細胞骨格リモデリングネットワークを介した免疫微小環境の調節と強く関連しています。Wnt-4シグナルの異常は、発生上の表現型に加え、線維化、異常分化、腫瘍関連の経路再配線といった疾患に関わるプロセスとも関連づけられており、生物医学研究モデルにおける機序解析の指標として利用されています。

Wnt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-4の機能に不可欠なWnt4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-4 HDRプラスミド（m）および Wnt-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。