Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401936

概要

WNT3 は分泌性糖タンパク質である Wnt-3 をコードしており、Frizzled/LRP 受容体を活性化して β-カテニンを安定化させ、TCF/LEF 依存的な転写を調節するカノニカル Wnt リガンドです。このシグナル伝達は、胚発生におけるパターニング、幹細胞および前駆細胞の維持、ならびに複数組織にわたる増殖・分化プログラムの制御に関与します。WNT3/Wnt-3 活性が異常になると、Wnt/β-カテニンネットワークの出力が攪乱され、上皮―間葉ダイナミクス、細胞運命の決定、組織恒常性を司る経路とも交差します。Wnt-3 関連シグナルの破綻は発生異常や疾患に関連する転写状態に関与するとされており、機序解明のための経路研究における有用な標的となります。

Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWNT3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WNT3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WNT3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WNT3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-3の機能に不可欠なWNT3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WNT3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWnt-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WNT3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-3 HDRプラスミド（h）および Wnt-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWNT3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWNT3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。