WDR73 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405788-ACT

WDR73 codifica una proteina contenente ripetizioni WD implicata in processi citoplasmatici e nucleari che supportano l’omeostasi dei tessuti proliferativi, con ruoli riportati nella progressione del ciclo cellulare, nell’organizzazione del citoscheletro e nel mantenimento della morfologia cellulare. Le impalcature a ripetizioni WD coordinano comunemente complessi multiproteici, suggerendo che WDR73 contribuisca a reti regolamentate di segnalazione e traffico intracellulare che plasmano lo sviluppo delle cellule neuronali e renali. L’alterazione genetica di WDR73 è stata associata ad anomalie del neurosviluppo e a fenotipi di nefropatia, coerentemente con funzioni nella maturazione di cervello e rene. Di conseguenza, WDR73 è di interesse per lo studio delle relazioni genotipo–fenotipo in modelli di malattie del neurosviluppo e renali, nonché delle vie che governano la differenziazione e le risposte allo stress cellulare.

WDR73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WDR73 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WDR73 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WDR73, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR73. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WDR73 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR73 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR73 nelle cellule tumorali con espressione di WDR73 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.