WDR73 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405788-ACT

WDR73は、増殖組織の恒常性を支える細胞質および核内のプロセスに関与するとされるWDリピート含有タンパク質をコードしており、細胞周期の進行、細胞骨格の構築、細胞形態の維持などにおける役割が報告されています。WDリピートは多タンパク質複合体の形成を調整する足場として働くことが多いことから、WDR73は神経細胞や腎細胞の発生を形作る、制御されたシグナル伝達および輸送（トラフィッキング）ネットワークに寄与している可能性があります。WDR73の遺伝学的破綻は、神経発達異常や腎症様の表現型と関連づけられており、脳および腎臓の成熟における機能と整合的です。そのためWDR73は、神経発達・腎疾患モデルにおける遺伝子型—表現型の関係の解析や、分化および細胞ストレス応答を制御する経路の研究において関心の高い標的となっています。

WDR73 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WDR73の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WDR73 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WDR73 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWDR73転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WDR73の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWDR73遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWDR73依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWDR73発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWDR73経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。