VSTM3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404147-ACT

TIGIT（別名VSTM3）は、活性化T細胞、制御性T細胞、NK細胞に発現する抑制性免疫受容体をコードしており、免疫恒常性の維持に寄与します。TIGITはPVR（CD155）やPVRL2（CD112）などのポリオウイルス受容体ファミリーのリガンドに結合することで、ITIM様シグナル伝達を調節し、共刺激経路とのバランスを取ります。その結果、細胞傷害活性、サイトカイン産生、免疫シナプス機能が制御されます。TIGITシグナルの変調は、免疫回避や抗腫瘍免疫の機能不全、さらには慢性炎症や自己免疫の状況にも関与するとされ、免疫チェックポイント生物学における重要な結節点となっています。接着および抑制のシグナルを統合する細胞表面受容体として、TIGITは受容体—リガンド相互作用、疲弊リンパ球の転写プログラム、ならびにCD226/DNAM-1シグナルとのクロストークを研究するための機序的な足がかりを提供します。

VSTM3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TIGITの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VSTM3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TIGIT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTIGIT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VSTM3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTIGIT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVSTM3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTIGIT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVSTM3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。