VRL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423688

概要

Trpv2は、刺激誘発性のCa²⁺流入に寄与する、一過性受容体電位（TRP）バニロイドファミリーに属する非選択性陽イオンチャネルであるマウスVRL-1（TRPV2）チャネルをコードします。VRL-1は、機械感覚や浸透圧・温度ストレス応答などを含む細胞プロセスに関与し、膜興奮性、細胞骨格ダイナミクス、転写プログラムに影響する下流のカルシウム依存的シグナル伝達を調節し得ます。免疫系および骨髄系細胞系列では、TRPV2活性が貪食や炎症性シグナル伝達と関連付けられている一方、興奮性組織では感覚変換の文脈で研究されています。TRPV2の機能または発現の変化は、神経障害性疼痛、炎症性疾患、心筋症、がん関連の細胞移動のモデルで検討されており、多様な経路における機序解明の標的としての重要性が支持されています。

VRL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrpv2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trpv2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trpv2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VRL-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VRL-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trpv2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VRL-1の機能に不可欠なTrpv2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trpv2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VRL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVRL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trpv2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VRL-1 HDRプラスミド（m）および VRL-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrpv2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrpv2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。