VPS51 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410709

概要

VPS51は、エンドソームからトランス・ゴルジネットワーク（TGN）への逆行性輸送を仲介する、ゴルジ体関連逆行性タンパク質（GARP）テザリング複合体の中核サブユニットをコードします。TGNにおける小胞の捕捉およびSNARE依存的な膜融合を促進することで、VPS51はゴルジ体の構造維持に寄与し、ソーティング受容体やカーゴタンパク質の適切なリサイクリングを支えます。GARP機能の破綻は、エンドリソソームの恒常性、タンパク質ソーティング、ならびに糖鎖付加に依存した成熟経路を乱し、その結果として細胞ストレス応答にも下流の影響を及ぼします。逆行性輸送の変調は、膜輸送の健全性が受容体の利用可能性やシグナル出力に影響する神経生物学、免疫シグナル、増殖性表現型のモデルにおいて重要性を持ちます。

VPS51 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVPS51遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VPS51内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VPS51のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPS51タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPS51シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VPS51欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPS51の機能に不可欠なVPS51エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VPS51ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPS51 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVPS51 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VPS51遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPS51 HDRプラスミド（h）および VPS51 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVPS51ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVPS51標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。