Vitronectin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401129-ACT

O gene humano VTN codifica a vitronectina, uma glicoproteína secretada abundante no plasma e na matriz extracelular (MEC), que se liga a integrinas e a múltiplas proteases para coordenar a adesão celular, a migração e a remodelação tecidual. A vitronectina participa na interação MEC–receptor e na sinalização de adesões focais, sustentando a organização do citoesqueleto e vias de sobrevivência, ao mesmo tempo que modula a proteólise por meio de interações com o inibidor do ativador do plasminogénio-1 (PAI-1). Também se articula com a regulação do complemento e com processos hemostáticos, influenciando microambientes inflamatórios e a renovação da matriz. A expressão desregulada de VTN ou a deposição alterada de vitronectina tem sido associada a fibrose, aterosclerose, invasão e metástase do cancro e patologia neurodegenerativa, tornando-o um alvo útil para estudar sinalização extracelular e programas de remodelação relevantes para doenças.

Vitronectin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vitronectin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vitronectin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vitronectin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vitronectin em células tumorais com expressão de VTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.