Vitamin D Receptor/VDR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400171-ACT

VDR codifica il recettore della vitamina D, un fattore di trascrizione nucleare attivato dal ligando che eterodimerizza con RXR per legarsi agli elementi di risposta alla vitamina D e coordinare programmi genici che controllano l’omeostasi di calcio e fosfato. Oltre al metabolismo minerale, VDR regola la differenziazione epiteliale, la modulazione immunitaria e l’integrità della barriera integrando segnali provenienti da MAPK, NF-κB e reti trascrizionali responsivi alle citochine. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di VDR sono state associate a fenotipi infiammatori e autoimmuni, a una deregolazione del controllo del ciclo cellulare e a cambiamenti dipendenti dal contesto negli stati trascrizionali associati ai tumori. Queste funzioni rendono VDR un nodo centrale per lo studio della biologia dei recettori degli ormoni steroidei e della regolazione genica in diversi tipi cellulari umani.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VDR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VDR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VDR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Vitamin D Receptor/VDR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VDR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Vitamin D Receptor/VDR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Vitamin D Receptor/VDR nelle cellule tumorali con espressione di VDR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.