vezatin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418454

Panoramica

VEZT codifica la vezatina, una proteina transmembrana delle giunzioni cellulari che si associa al complesso cadherina–catenina e collega le giunzioni aderenti al citoscheletro di actina. La vezatina contribuisce all’adesione cellula–cellula nelle cellule epiteliali, all’organizzazione delle giunzioni e ai processi di meccanotrasduzione che influenzano l’architettura e la polarità dei tessuti. Attraverso il suo ruolo nelle giunzioni aderenti, VEZT interagisce con vie che regolano la dinamica del citoscheletro e la segnalazione dipendente dal contatto. Alterazioni dell’espressione di VEZT o il rimodellamento delle giunzioni sono stati studiati in contesti di disfunzione epiteliale e di cambiamenti legati al cancro nell’adesione e nell’invasività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO vezatin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VEZT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VEZT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VEZT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina vezatin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VEZT per lo studio della segnalazione di vezatin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VEZT critici per la funzione di vezatin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VEZT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal vezatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal vezatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VEZT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal vezatin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR vezatin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VEZT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VEZT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.