Vav2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401490-ACT

O VAV2 humano codifica a Vav2, um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) da família Rho que catalisa a troca de GDP por GTP em Rac1, RhoA e Cdc42, coordenando a remodelação do citoesqueleto de actina, a adesão celular e a migração direcional. A Vav2 atua a jusante de receptores tirosina-quinase, integrinas e receptores imunes, conectando sinais extracelulares a programas citosqueléticos e transcricionais por meio de vias que se cruzam com a sinalização de MAPK e PI3K. Por meio dessas funções, a Vav2 ajuda a regular a morfologia celular, a endocitose e alterações dependentes de sinal na motilidade e em fenótipos relacionados à invasão. A expressão ou sinalização desregulada de VAV2 tem sido associada a programas aberrantes de proliferação e migração na biologia do câncer e a contextos alterados de sinalização imune e vascular relevantes para mecanismos de doença.

Vav2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VAV2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vav2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VAV2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VAV2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vav2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VAV2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vav2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vav2 em células tumorais com expressão de VAV2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.