Vasorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404942

概要

VASNは、血管平滑筋細胞に豊富に発現するI型膜貫通型糖タンパク質であるバソリン（vasorin）をコードしており、細胞表面における細胞外シグナル伝達を調節します。バソリンはTGF-βリガンドに結合して隔離することで、細胞増殖・遊走・細胞外マトリックスのリモデリングを制御するSMAD依存性の転写プログラムに影響を与えると報告されています。これらの相互作用を通じて、バソリンは血管恒常性の維持や、動脈硬化、血管損傷に対する応答、線維化に関連する表現型に結び付いた組織リモデリング過程に寄与します。さらに、複数の腫瘍の文脈でVASN発現の変化が観察されており、微小環境シグナルや細胞状態遷移を研究する上での標的としての有用性も示唆されています。

Vasorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVASN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VASN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VASNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Vasorinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Vasorinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VASN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Vasorinの機能に不可欠なVASNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VASNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Vasorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVasorin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VASN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Vasorin HDRプラスミド（h）および Vasorin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVASNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVASN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。