Vasorin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404942

Panoramica

VASN codifica vasorin, una glicoproteina transmembrana di tipo I arricchita nelle cellule muscolari lisce vascolari, che modula la segnalazione extracellulare alla superficie cellulare. È stato riportato che vasorin si lega ai ligandi di TGF-β e li sequestra, influenzando i programmi trascrizionali dipendenti da SMAD che regolano proliferazione e migrazione cellulare, nonché il rimodellamento della matrice extracellulare. Attraverso queste interazioni, vasorin contribuisce all’omeostasi vascolare e ai processi di rimodellamento tissutale associati ad aterosclerosi, risposte a lesioni vascolari e fenotipi legati alla fibrosi. Un’alterata espressione di VASN è stata inoltre osservata in diversi contesti tumorali, a supporto del suo impiego in studi sulla segnalazione del microambiente e sulle transizioni di stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Vasorin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VASN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VASN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VASN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Vasorin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VASN per lo studio della segnalazione di Vasorin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VASN critici per la funzione di Vasorin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VASN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Vasorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Vasorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VASN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Vasorin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Vasorin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VASN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VASN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.