VAMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402306

概要

VAMP3は、小胞関連膜タンパク質3（VAMP-3）をコードしており、恒常的ならびに調節性エキソサイトーシスに必要な膜融合イベントを媒介するv-SNAREです。リサイクリングエンドソームと細胞膜の間の小胞輸送に関与し、受容体のリサイクリング、サイトカイン分泌、そして細胞移動および極性化の際の膜タンパク質の供給を支えます。VAMP-3の機能は、免疫細胞の活性化や宿主―病原体相互作用を形作る、エンドソームのソーティングおよびSNARE複合体の組み立て経路とも交差します。VAMP3が関与する小胞輸送の異常は、炎症、グルコーストランスポーター動態の変化、ならびに膜ターンオーバーや浸潤に関わるがん関連の変化といった文脈で研究されています。

VAMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVAMP3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VAMP3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VAMP3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VAMP-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VAMP-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VAMP3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VAMP-3の機能に不可欠なVAMP3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VAMP3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VAMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVAMP-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VAMP3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VAMP-3 HDRプラスミド（h）および VAMP-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVAMP3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVAMP3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。