USP47 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403157-ACT

USP47は、ユビキチン化を逆転させるヒトのユビキチン特異的プロテアーゼをコードしており、タンパク質の安定性、細胞内局在、ならびにシグナル伝達の強度を調節します。USP47は主要な基質の脱ユビキチン化を介して、DNA損傷応答、細胞周期の進行、そしてプロテオスタシスとゲノム維持を形作るストレス適応経路の制御に関与すると報告されています。USP47活性の変化は、ユビキチン依存的な分解回転やチェックポイントシグナル伝達を変動させ得ますが、これらの過程はがん生物学や、タンパク質品質管理の破綻を伴う他の疾患でしばしば攪乱されています。そのためUSP47は、ユビキチン介在性の制御が細胞の生存適応度、複製の完全性、転写プログラムに影響する文脈で広く研究されています。

USP47 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP47の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP47 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP47 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP47転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP47の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP47遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP47依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP47発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP47経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。