USP18 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402259-ACT

O USP18 humano codifica a peptidase específica de ubiquitina 18, uma deISGuilase induzida por interferon que remove ISG15 de substratos proteicos e atua como um importante regulador negativo da sinalização de interferon tipo I. Ao modular a dinâmica da ISGuilação e atenuar a saída da via JAK–STAT por meio de interações com IFNAR2, o USP18 molda programas antivirais, a responsividade a citocinas e a homeostase da imunidade inata. Alterações na atividade de USP18 têm sido associadas a assinaturas de interferon desreguladas e fenótipos inflamatórios, e o gene é frequentemente estudado em contextos como restrição viral, evasão imune e interações entre tumor e sistema imune. Como resultado, o USP18 é um ponto útil para investigar o crosstalk entre modificação pós-traducional, respostas transcricionais ao interferon e proteostase.

USP18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP18. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP18 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP18 em células tumorais com expressão de USP18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.