USF-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401713-ACT

O gene humano USF2 (upstream stimulatory factor 2) codifica a USF-2, um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básica com zíper de leucina, que se liga a motivos E-box para coordenar programas de expressão gênica que controlam proliferação, diferenciação, metabolismo e respostas ao estresse celular. A USF-2 participa da regulação transcricional a jusante de sinalização ligada a MAPK e interage com a maquinaria de modificação da cromatina para ajustar a atividade de promotores em diversos tipos celulares. A atividade desregulada de USF2 tem sido associada a alterações no controle do ciclo celular, reprogramação metabólica e estados transcricionais inflamatórios descritos em contextos de câncer e de doenças cardiometabólicas. Essas características tornam a USF-2 um nó útil para estudos mecanísticos de redes transcricionais e de crosstalk entre vias.

USF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USF-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USF-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USF-2 em células tumorais com expressão de USF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.