UPIIIa Plasmide Double Nickase (h): sc-401796-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UPIIIa Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il UPIIIa Double Nickase Plasmid (h) e il UPIIIa Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira UPK3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UPIIIa Antibody (C-6): sc-166808
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UPIIIa Plasmide Double Nickase (h) | sc-401796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UPIIIa Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UPK3A codifica l’uroplachina IIIa (UPIIIa), una glicoproteina di membrana di tipo I che si assembla con altre uroplachine per formare placche uroteliali sulla superficie apicale delle cellule ombrello della vescica. Questo complesso sostiene l’integrità della barriera epiteliale, la specializzazione di membrana e le risposte allo stiramento meccanico, contribuendo alla differenziazione dell’urotelio e all’omeostasi tissutale. Schemi di espressione alterati delle uroplachine sono frequentemente utilizzati come indicatori dello stato uroteliale e dell’identità di linea cellulare negli studi sullo sviluppo e sulla patologia vescicale. Le perturbazioni correlate a UPK3A sono quindi rilevanti per la ricerca sulla disfunzione della barriera uroteliale, il rimodellamento epiteliale e i fenotipi molecolari associati a contesti di malattia della vescica.
UPIIIa Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UPK3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UPK3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UPK3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UPK3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.