UKHC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402349-ACT

KIF5Bは、キネシン-1重鎖アイソフォームUKHCをコードしており、極性をもつ細胞において、ATP依存的な小胞、タンパク質複合体、オルガネラの順行性輸送を担う微小管ベースのモータータンパク質です。キネシン軽鎖やカーゴアダプターとの協調を介して、KIF5Bは細胞内輸送、中心体および紡錘体のダイナミクス、ならびに細胞骨格の組織化を支え、その結果、有糸分裂、分泌、神経輸送といった過程に影響を与えます。KIF5Bの活性または発現が異常になると、オルガネラ分布やシグナル伝達が乱れる可能性があり、KIF5Bは腫瘍性遺伝子融合（例：KIF5B-RET）や増殖経路の変化との関連でしばしば研究されています。これらの特性により、KIF5Bはヒト細胞モデルにおける微小管輸送機構、細胞周期制御、ならびに輸送依存的シグナル伝達を検討するための有用な結節点となります。

UKHC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIF5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UKHC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIF5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIF5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UKHCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIF5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUKHC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIF5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUKHC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。