Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT1A2 (m): sc-423602

Présentation

Le gène murin **Ugt1a2** code l’UDP‑glucuronosyltransférase 1A2 (UGT1A2), une enzyme microsomale de phase II de conjugaison qui catalyse la glucuronidation de divers métabolites endogènes et xénobiotiques. En transférant l’acide glucuronique à des substrats lipophiles, UGT1A2 augmente leur solubilité et favorise leur élimination via des voies de détoxification hépatiques et extra‑hépatiques. L’activité d’Ugt1a2 contribue au réseau plus large dépendant des UGT1A, qui module le devenir des composés chimiques, les réponses au stress oxydatif et les interactions avec le métabolisme piloté par les cytochromes P450. Les perturbations génétiques ou expérimentales de la conjugaison médiée par les UGT sont pertinentes pour étudier des modifications de la pharmacocinétique, la susceptibilité aux lésions chimiques et des phénotypes liés au métabolisme dans des modèles murins de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT1A2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ugt1a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ugt1a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ugt1a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGT1A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ugt1a2 pour l'étude de la signalisation de UGT1A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ugt1a2 essentiels à la fonction de UGT1A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ugt1a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGT1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UGT1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ugt1a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGT1A2 plasmide HDR (m) et le UGT1A2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ugt1a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ugt1a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.