Ubr4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427303
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Ubr4 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Ubr4-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ubr4: sc-100615
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ubr4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-427303 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Ubr4 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase der N-Recognin-Familie, die die Proteinqualitätskontrolle unterstützt, indem sie destabilisierende N-terminale Aminosäurereste erkennt und den ubiquitinabhängigen Abbau fördert. In Mauszellen trägt UBR4 zur Proteostase, zur Regulation der Stabilität von Proteinkomplexen und zur Koordination stressantwortlicher Abbauwege bei und verknüpft damit die Biologie des Ubiquitin–Proteasom-Systems mit der N-end-rule-Signalweglogik. Beschriebene Funktionen verbinden UBR4 zudem mit Membrantransportprozessen und der neuronalen Homöostase, was es für Studien zu neuroentwicklungs- und neurodegenerativen Mechanismen relevant macht, bei denen Ubiquitin-Signalgebung und Proteom-Erhalt gestört sind. Da Ubiquitinierung mit Zellzykluskontrolle, Signaltransduktion und Zytoskelettorganisation verzahnt ist, eignet sich eine Störung von Ubr4, um zu untersuchen, wie Ubiquitin-Ligasen diese Prozesse in normalen sowie krankheitsassoziierten Zuständen feinabstimmen.
Das Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ubr4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ubr4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ubr4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ubr4-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ubr4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ubr4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ubr4-Exone abzielen, die für die Ubr4-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ubr4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ubr4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ubr4 HDR-Plasmid (m) und Ubr4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ubr4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ubr4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.