UBE1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402844

Visão geral

UBA1 codifica a enzima ativadora de modificadores do tipo ubiquitina 1 (UBE1), a enzima E1 que inicia a ativação da ubiquitina dependente de ATP e transfere ubiquitina para enzimas conjugadoras E2, impulsionando a função do sistema ubiquitina–proteassoma. Por meio desse ponto de controle a montante, a UBE1 influencia a renovação global de proteínas, a proteostase e as respostas ao estresse, afetando processos como a progressão do ciclo celular, a sinalização de dano ao DNA e a regulação de vias da imunidade inata. A perturbação da atividade de UBA1 pode remodelar redes de sinalização dependentes de ubiquitina e alterar a estabilidade de proteínas regulatórias-chave, tornando-a relevante para estudos de neurodegeneração, dependências de proteostase associadas ao câncer e distúrbios ligados ao X, incluindo a atrofia muscular espinhal. Como a UBE1 está no topo da ubiquitinação, a desestabilização genética oferece uma abordagem direta para dissecar as contribuições da via da ubiquitina para a homeostase celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UBE1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UBA1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UBA1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UBA1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UBE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UBA1 para a investigação da sinalização de UBE1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UBA1 críticos para a função UBE1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UBA1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UBE1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo UBE1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UBA1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UBE1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR UBE1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UBA1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UBA1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.