UBA52 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423573

Descripción general

Uba52 codifica una proteína de fusión ubiquitina–proteína ribosomal (UBA52) que se procesa para generar ubiquitina y la proteína ribosomal L40, vinculando la disponibilidad de ubiquitina con la biogénesis ribosomal y la proteostasis global. A través de vías dependientes de ubiquitina, UBA52 favorece el recambio regulado de proteínas mediante el proteasoma, influye en las respuestas al estrés celular y contribuye al control de la traducción. Las alteraciones en la homeostasis de la ubiquitina y en la función ribosomal son ampliamente relevantes para los mecanismos de estrés proteotóxico, la progresión del ciclo celular y la señalización inflamatoria. Dado que la ubiquitinación y el control translacional se modifican con frecuencia en la biología del cáncer y en modelos de neurodegeneración, Uba52 constituye un nodo útil para estudiar cómo la proteostasis afecta la aptitud celular y la adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBA52 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Uba52 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Uba52 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Uba52 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBA52.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Uba52 para la investigación de la señalización de UBA52, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Uba52 críticos para la función de UBA52
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Uba52 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBA52 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UBA52 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Uba52. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBA52 (m) y el plásmido HDR UBA52 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Uba52 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Uba52 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.