Tyro3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423567-ACT

Tyro3 codifica uma tirosina-quinase receptora da família TAM que regula a sobrevivência celular, a proliferação e a remodelação do citoesqueleto em resposta a ligantes como GAS6 e a proteína S. Em tecidos de camundongo, a sinalização de TYRO3 faz interface com as vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT, moldando processos que incluem a depuração fagocítica de células apoptóticas e a modulação do tônus imune inato. Por meio de crosstalk com AXL e MERTK, Tyro3 contribui para o controle homeostático da sinalização inflamatória e pode influenciar transições de estado celular em microambientes diversos. A atividade desregulada de receptores TAM tem sido associada a regulação imune aberrante e a contextos de sinalização oncogênica, tornando Tyro3 um nó útil para estudos mecanísticos em modelos de neurobiologia, imunologia e biologia do câncer.

Tyro3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tyro3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tyro3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tyro3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tyro3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tyro3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tyro3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tyro3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tyro3 em células tumorais com expressão de Tyro3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.