Twinkle Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404159

Panoramica

TWNK codifica Twinkle, un’elicasi del DNA mitocondriale essenziale per la replicazione del mtDNA e il mantenimento dei nucleoidi, che agisce insieme al replisoma mitocondriale per sostenere la capacità di fosforilazione ossidativa. Svolgendo il mtDNA a doppia elica durante la replicazione, Twinkle contribuisce a preservare il numero di copie del mtDNA e l’integrità del genoma, influenzando la trascrizione mitocondriale, la biogenesi della catena respiratoria e l’omeostasi energetica cellulare. Alterazioni di TWNK sono collegate all’instabilità del genoma mitocondriale, inclusa la deplezione di mtDNA o la presenza di delezioni multiple, e sono associate a fenotipi di malattie mitocondriali neuromuscolari e neurodegenerative. Gli studi di perdita di funzione di TWNK sono quindi rilevanti per indagare la segnalazione di stress mitocondriale, il rimodellamento bioenergetico e le risposte al danno del mtDNA associate alla replicazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Twinkle (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TWNK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TWNK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TWNK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Twinkle.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TWNK per lo studio della segnalazione di Twinkle, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TWNK critici per la funzione di Twinkle
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TWNK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Twinkle CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TWNK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Twinkle Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Twinkle (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TWNK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TWNK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.