Plasmide CRISPR/Cas9 KO Twinkle (h): sc-404159

Présentation

TWNK code pour Twinkle, une hélicase de l’ADN mitochondrial essentielle à la réplication de l’ADNmt et au maintien des nucléoïdes, agissant avec le replisome mitochondrial pour soutenir la capacité de phosphorylation oxydative. En déroulant l’ADNmt double brin au cours de la réplication, Twinkle contribue à préserver le nombre de copies d’ADNmt et l’intégrité du génome, influençant la transcription mitochondriale, la biogenèse de la chaîne respiratoire et l’homéostasie énergétique cellulaire. Une perturbation de TWNK est liée à une instabilité du génome mitochondrial, incluant une déplétion de l’ADNmt ou des délétions multiples, et est associée à des phénotypes de maladies mitochondriales neuromusculaires et neurodégénératives. Les études de perte de fonction de TWNK sont donc pertinentes pour l’exploration de la signalisation du stress mitochondrial, du remodelage bioénergétique et des réponses aux dommages de l’ADNmt associés à la réplication.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Twinkle (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TWNK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TWNK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TWNK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Twinkle.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TWNK pour l'étude de la signalisation de Twinkle, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TWNK essentiels à la fonction de Twinkle
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TWNK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Twinkle plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Twinkle plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TWNK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Twinkle plasmide HDR (h) et le Twinkle (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TWNK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TWNK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.