TUSC3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405571-LAC

TUSC3 (tumor suppressor candidate 3) codifica una subunità del complesso oligosaccariltransferasi (OST) localizzata nel reticolo endoplasmatico, che supporta la glicosilazione N-linked e il controllo qualità del ripiegamento proteico. Attraverso il suo ruolo nel trasferimento co-traduzionale dei glicani, TUSC3 influenza la proteostasi, le risposte allo stress del RE e la maturazione di proteine di membrana e secrete che confluiscono in vie di segnalazione e di adesione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di TUSC3 sono state associate a una compromissione dell’omeostasi delle glicoproteine e sono state studiate in contesti che includono la biologia del cancro e fenotipi neuroevolutivi come la disabilità intellettiva. Queste caratteristiche rendono TUSC3 un nodo utile per indagare i processi associati al RE, la segnalazione dipendente dalle glicoproteine e i meccanismi di adattamento allo stress nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TUSC3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TUSC3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TUSC3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TUSC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TUSC3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TUSC3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.