TUSC3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-405571-LAC

TUSC3 (candidato supressor de tumor 3) codifica uma subunidade do complexo oligosacariltransferase (OST), localizada no retículo endoplasmático, que dá suporte à glicosilação N-ligada e ao controle de qualidade do dobramento proteico. Por meio de seu papel na transferência co-traducional de glicanos, TUSC3 influencia a proteostase, as respostas ao estresse do RE e a maturação de proteínas de membrana e secretadas, que alimentam vias de sinalização e de adesão. Alterações na expressão ou na função de TUSC3 têm sido associadas à ruptura da homeostase de glicoproteínas e foram estudadas em contextos que incluem a biologia do câncer e fenótipos do neurodesenvolvimento, como deficiência intelectual. Essas características tornam o TUSC3 um ponto útil para investigar o processamento associado ao RE, a sinalização dependente de glicoproteínas e mecanismos de adaptação ao estresse em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TUSC3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TUSC3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TUSC3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TUSC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TUSC3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TUSC3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.