TUSC3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405571-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TUSC3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TUSC3ダブルニカースプラスミド（h）およびTUSC3ダブルニカースプラスミド（h2）は、TUSC3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TUSC3 抗体 (D-9): sc-390566
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TUSC3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405571-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TUSC3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405571-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUSC3（tumor suppressor candidate 3）は、小胞体膜タンパク質をコードしており、オリゴ糖転移酵素（OST）複合体のサブユニットとして機能して、N結合型糖鎖付加（N-linked glycosylation）およびタンパク質の品質管理を支えます。糖タンパク質のフォールディングや小胞体（ER）恒常性に影響を与えることで、TUSC3はERストレスシグナル伝達や細胞分化プログラムと交差するプロテオスタシス経路に関与します。TUSC3の発現変動や機能喪失は糖鎖付加の異常と関連することが示されており、神経発達表現型やがん生物学に関する研究でも報告されています。そのため、作用機序の解明に向けた研究対象として重要です。ヒト細胞では、TUSC3の改変は、ER関連の糖鎖付加が受容体成熟、分泌経路機能、ストレス適応応答に与える影響を調べるために一般的に用いられます。
TUSC3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TUSC3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TUSC3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TUSC3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TUSC3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。