TudorSN Plasmide Double Nickase (m2): sc-425184-NIC-2

Nel topo, Snd1 codifica TudorSN (staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1), una proteina multifunzionale legante l’RNA che integra i processi di elaborazione dell’RNA con programmi di regolazione genica partecipando al complesso di silenziamento indotto dall’RNA, alla repressione mediata dai microRNA e a eventi associati allo spliceosoma. TudorSN contribuisce al controllo della stabilità e della traduzione dell’mRNA ed è stata collegata alla co-regolazione trascrizionale, alla dinamica dei granuli da stress e alle vie di segnalazione lipidiche/metaboliche in diversi tipi cellulari. Un’attività deregolata di Snd1/TudorSN è associata ad alterazioni degli stati proliferativi e infiammatori ed è spesso studiata nel contesto della segnalazione oncogenica, della regolazione immunitaria e della neurobiologia. La perturbazione genetica di Snd1 in modelli murini supporta studi meccanicistici della regolazione post-trascrizionale, delle vie dei piccoli RNA e delle reti di interazione RNA–proteina mediante editing basato su CRISPR, genomica funzionale e saggi mirati alle vie di segnalazione.

TudorSN Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Snd1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Snd1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Snd1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Snd1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.