TUBAL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401513-ACT

O TUBAL3 humano codifica uma proteína semelhante à alfa-tubulina que contribui para o citoesqueleto de microtúbulos, dando suporte a processos como a organização do fuso mitótico, o tráfego intracelular e a manutenção da polaridade celular. Como parte da rede de tubulina, o TUBAL3 está funcionalmente ligado a vias que controlam a progressão do ciclo celular e a remodelação do citoesqueleto, que influenciam programas de proliferação e diferenciação. Alterações na dinâmica dos microtúbulos estão amplamente implicadas na instabilidade genômica e na migração celular aberrante, tornando os membros da família da tubulina relevantes para estudos de transformação oncogênica e fenótipos do neurodesenvolvimento. Traçar o perfil da regulação de TUBAL3 pode ajudar a esclarecer como o balanço de isoformas de alfa-tubulina molda o comportamento dos microtúbulos em contextos celulares específicos.

TUBAL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBAL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TUBAL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBAL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBAL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TUBAL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBAL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TUBAL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TUBAL3 em células tumorais com expressão de TUBAL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.