TSHZ3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410072-ACT

TSHZ3 (teashirt zinc finger homeobox 3) kodiert einen nukleären Transkriptionsfaktor, der durch C2H2-Zinkfinger-Domänen charakterisiert ist und während der Entwicklung sowie der Festlegung von Zelltypen Genexpressionsprogramme reguliert. In menschlichen Geweben trägt TSHZ3 zur transkriptionellen Kontrolle von Differenzierungs- und Musterbildungsprozessen bei und ist in übergeordnete genregulatorische Netzwerke eingebunden, die Linienidentität und Organogenese prägen. Eine Fehlregulation der TSHZ3-Expression oder -Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter Schaltkreisbildung in Verbindung gebracht, was es für Studien zur transkriptionellen Kontrolle in neuronalen und mesenchymalen Linien relevant macht. Als DNA-bindender Regulator wird TSHZ3 häufig in Signalwegen untersucht, die Morphogenese, synaptische Entwicklung und Zellschicksalsentscheidungen beeinflussen.

TSHZ3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TSHZ3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TSHZ3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TSHZ3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TSHZ3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TSHZ3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TSHZ3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TSHZ3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TSHZ3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TSHZ3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.