tsg 101 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400290-ACT

TSG101 (gene de suscetibilidade tumoral 101) codifica a proteína tsg101, um componente central do complexo ESCRT-I, que coordena a triagem endossomal, o reconhecimento de cargas ubiquitinadas e a biogênese de corpos multivesiculares. Por meio de remodelamento de membrana dependente de ESCRT, a TSG101 contribui para a redução da expressão de receptores, a citocinese (abscisão), o tráfego associado à autofagia e a formação de exossomos, além de desempenhar funções adicionais no brotamento de vírus envelopados. A perturbação do tráfego regulado por TSG101 pode alterar a dinâmica de sinalização de receptores de superfície e as respostas ao estresse, vinculando essa via a processos oncogênicos, a defeitos de proteostase associados à neurodegeneração e a estudos de replicação viral. Como um adaptador amplamente expresso no tráfego de membranas, a TSG101 é frequentemente utilizada como ponto de entrada mecanístico para investigar o transporte intracelular e a comunicação mediada por vesículas em células humanas.

tsg 101 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TSG101 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

tsg 101 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TSG101 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TSG101, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de tsg 101. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TSG101 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de tsg 101 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via tsg 101 em células tumorais com expressão de TSG101 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.