Trypsin-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423521

Panoramica

Mouse Try4 codifica la tripsina-4, una proteasi serinica secreta che scinde i substrati peptidici dopo residui basici e contribuisce alla proteolisi extracellulare. Regolando il turnover proteico nello spazio pericellulare, Try4 può influenzare la segnalazione mediata dai recettori attivati da proteasi, la maturazione di peptidi bioattivi e il rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività proteasica dei membri della famiglia delle tripsine si interseca con le cascate infiammatorie e con la dinamica della barriera epiteliale attraverso un’azione coordinata con altre proteasi seriniche e con inibitori endogeni. L’alterazione dell’equilibrio tra proteasi e inibitori è spesso analizzata in modelli di danno tissutale, infiammazione e rimodellamento del microambiente tumorale, rendendo Try4 un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Try4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Try4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Try4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Trypsin-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Try4 per lo studio della segnalazione di Trypsin-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Try4 critici per la funzione di Trypsin-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Try4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Trypsin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Try4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Trypsin-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Trypsin-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Try4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Try4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.