TRPV6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402632-ACT

TRPV6は、TRPバニロイドファミリーに属するCa²⁺高選択性の上皮性チャネルをコードし、形質膜を介したカルシウム流入を担います。細胞質Ca²⁺シグナル伝達を調節することで、TRPV6はカルシウム依存的な転写プログラム、上皮輸送、細胞分化に影響を与えます。TRPV6活性は、カルシウム流入下流の経路（カルモジュリン依存性シグナル伝達や、より広範なイオン恒常性ネットワークなど）と連動しています。TRPV6発現の異常やカルシウム取り扱いの変化は、上皮の病態生理およびがん関連表現型と関連づけられており、増殖・浸潤・ホルモン調節性シグナル伝達の研究における機序解明の要所（メカニスティック・ノード）としての有用性を支持します。

TRPV6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPV6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPV6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPV6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPV6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPV6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPV6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPV6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPV6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPV6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。