TRPV5 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-431458

개요

Trpv5는 상피의 정단막(apical)에서 Ca²⁺ 유입 채널로 기능하는, 일시적 수용체 전위(transient receptor potential, TRP) 바닐로이드 계열 중 칼슘 선택성이 매우 높은 구성원인 TRPV5를 암호화한다. 마우스 신장의 원위곡세관(distal convoluted tubule)과 연결세관(connecting tubule)에서 TRPV5는 세포횡단성(transcellular) 칼슘 재흡수를 지지하며, 칼빈딘(calbindin)에 의한 완충과 기저외측막(basolateral)에서 NCX1 및 PMCA를 통한 배출과 연계되어 전신 칼슘 항상성을 형성한다. 채널 활성은 세포내 Ca²⁺ 피드백, 포스포이노시타이드 신호전달, pH, 그리고 비타민 D 및 PTH를 포함한 호르몬 조절 인자들에 의해 조절되며, TRPV5를 Ca²⁺-의존적 신호전달과 상피 수송 프로그램과 연결한다. TRPV5-의존적 수송의 이상 조절은 마우스 모델에서 고칼슘뇨, 신장결석 감수성, 그리고 무기질 대사 표현형에 대한 연구와 관련이 있다.

TRPV5 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Trpv5 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Trpv5 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Trpv5의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 TRPV5 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 TRPV5 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Trpv5 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• TRPV5 기능에 중요한 Trpv5 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Trpv5 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• TRPV5 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 TRPV5 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Trpv5 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  TRPV5 HDR 플라스미드 (m) 및 TRPV5 HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Trpv5 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Trpv5 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.