TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403740

概要

TRPC3は、TRPC3/6/7サブファミリーに属するCa2+透過性の非選択的陽イオンチャネルであり、受容体活性化ホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達を膜の脱分極および細胞内へのカルシウム流入に結び付けます。チャネル活性はジアシルグリセロール（DAG）によって調節され、GPCRおよび受容体型チロシンキナーゼ経路の下流シグナルを統合することで、Ca2+依存的な転写、細胞骨格リモデリング、分泌、収縮性を制御します。TRPC3を含むチャネル複合体は、カルシニューリン/NFATやMAPK経路とのクロストークを介して、神経細胞の興奮性やシナプス伝達、ならびに平滑筋および心筋におけるカルシウム制御にも寄与します。TRPC3/6/7軸の調節異常は、心血管疾患や神経変性疾患の文脈における異常なCa2+シグナル伝達と関連付けられており、肥大、線維化、興奮毒性ストレスのモデルでしばしば解析対象となります。

TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRPC3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRPC3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRPC3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPC3/6/7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPC3/6/7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRPC3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPC3/6/7の機能に不可欠なTRPC3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRPC3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRPC3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPC3/6/7 HDRプラスミド（h）および TRPC3/6/7 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRPC3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRPC3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。