Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401530

概要

TNNI2は、Ca²⁺依存的にアクチン‐ミオシン相互作用を調節するトロポニン複合体の抑制性サブユニットである速筋型トロポニンI（Troponin I-FS）をコードします。トロポミオシンおよびアクチンに結合することで、Troponin I-FSは、サルコメアの興奮‐収縮連関の下流において、細いフィラメントを弛緩状態と収縮状態の間で切り替えるのに寄与します。TNNI2の機能は、カルシウムシグナル、筋原線維形成、ならびに筋線維タイプ特異的な収縮プログラムと統合され、発生張力や疲労耐性の形成に関与します。トロポニン調節やサルコメア機能に影響する遺伝学的異常は、遺伝性の骨格筋拘縮やミオパチーの表現型と関連しており、TNNI2は筋生理および疾患関連の収縮障害の機序研究における重要な標的となります。

Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNNI2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNNI2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNNI2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Troponin I-FSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Troponin I-FSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNNI2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Troponin I-FSの機能に不可欠なTNNI2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNNI2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTroponin I-FS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNNI2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Troponin I-FS HDRプラスミド（h）および Troponin I-FS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNNI2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNNI2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。