Troponin I-FS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401530

Panoramica

TNNI2 codifica la troponina I del muscolo scheletrico a contrazione rapida (Troponin I-FS), la subunità inibitoria del complesso della troponina che regola le interazioni actina–miosina in modo dipendente dal Ca²⁺. Legandosi alla tropomiosina e all’actina, la Troponin I-FS contribuisce a commutare il filamento sottile tra gli stati di rilassamento e di contrazione a valle dell’accoppiamento eccitazione–contrazione sarcomerico. L’attività di TNNI2 si integra con la segnalazione del calcio, la miofibrillogenesi e programmi contrattili specifici del tipo di fibra muscolare che determinano la produzione di forza e la resistenza alla fatica. Alterazioni genetiche che influenzano la regolazione della troponina e la funzione del sarcomero sono associate a fenotipi ereditari di contrattura e miopatia del muscolo scheletrico, rendendo TNNI2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici della fisiologia muscolare e dei difetti di contrazione associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNNI2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNNI2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNNI2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin I-FS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNNI2 per lo studio della segnalazione di Troponin I-FS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNNI2 critici per la funzione di Troponin I-FS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNNI2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNNI2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin I-FS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Troponin I-FS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNNI2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNNI2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.