Troponin I-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423459

概要

Tnni3 は、心筋型トロポニンIアイソフォームをコードしており、興奮収縮連関の過程でアクチン–ミオシン相互作用を制御するため、細いフィラメント上でトロポニンTおよびトロポニンCと調節複合体を形成します。トロポニンIは、Ca²⁺依存的にミオシンATPアーゼ活性を調節することでサルコメアの収縮性と弛緩を微調整し、筋原線維のCa²⁺感受性を変化させるキナーゼ媒介性リン酸化などのシグナル入力を統合します。マウス心筋細胞では、Tnni3 は心拍出量を支えるサルコメア構築およびカルシウム制御過程の中核を担います。トロポニンIの機能や制御の異常は、心筋症の機序、収縮機能障害、ストレス誘導性リモデリング表現型の文脈で一般に研究されています。

Troponin I-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnni3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnni3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnni3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Troponin I-Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Troponin I-Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnni3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Troponin I-Cの機能に不可欠なTnni3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnni3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Troponin I-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTroponin I-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnni3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Troponin I-C HDRプラスミド（m）および Troponin I-C HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnni3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnni3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。