Troponin I-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400466-ACT

TNNI3 codifica a troponina I cardíaca, a subunidade inibitória do complexo de troponina que acopla a dinâmica de Ca²⁺ citosólico à ativação do sarcômero no músculo estriado. Ao modular a interação actina–miosina por meio da regulação dependente de Ca²⁺ do posicionamento da tropomiosina, a troponina I-C ajuda a determinar a força contrátil e a cinética de relaxamento no filamento fino do cardiomiócito. A função de TNNI3 está integrada ao acoplamento excitação–contração, à montagem sarcomérica e à sinalização dependente de fosforilação que ajusta a sensibilidade ao Ca²⁺ dos miofilamentos. Alterações genéticas e regulatórias de TNNI3 estão associadas a fenótipos relacionados a cardiomiopatias e a mecanismos arritmogênicos, tornando-o um alvo central para o estudo da contratilidade cardíaca e das respostas ao estresse miofibrilar.

Troponin I-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNNI3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Troponin I-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNNI3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNNI3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Troponin I-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNNI3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Troponin I-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Troponin I-C em células tumorais com expressão de TNNI3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.