Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423482

概要

Tpm2は、アクチン結合性のコイルドコイルタンパク質であるトロポミオシンβをコードしており、F-アクチンに沿って重合して細いフィラメントを安定化させ、ミオシンモーターやアクチン関連因子のアクセスを調節します。筋細胞および非筋細胞において、トロポミオシンのアイソフォームは、ストレスファイバーやサルコメア構造内のアクチンフィラメント動態を調整することで、収縮性、細胞骨格の張力、細胞形態、メカノトランスダクションに寄与します。アクトミオシン組織化における役割を通じて、TPM2は、Rho GTPase依存性の細胞骨格経路と接点を持つ細胞遊走、接着のリモデリング、力発生といった過程に影響します。トロポミオシン組成やアクチンフィラメント制御の破綻は、筋構造・筋機能の障害や、発生・疾患モデルで研究される細胞骨格駆動性の表現型と関連します。

Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpm2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpm2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpm2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tropomyosin βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tropomyosin βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpm2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tropomyosin βの機能に不可欠なTpm2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpm2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTropomyosin β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpm2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tropomyosin β HDRプラスミド（m）および Tropomyosin β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpm2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpm2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。