TrkB Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400142-LAC

NTRK2 codifica o recetor tirosina-quinase TrkB, um recetor de neurotrofinas de alta afinidade para BDNF e NT-4/5 que regula a sobrevivência neuronal, a diferenciação, a plasticidade sináptica e a remodelação de circuitos dependente da atividade. Após a ligação do ligando, o TrkB ativa as cascatas de sinalização canónicas PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK e PLCγ–Ca2+, coordenando programas transcricionais e a dinâmica do citoesqueleto que moldam o crescimento de neuritos e a função sináptica. A desregulação da sinalização NTRK2/TrkB tem sido associada a alterações do neurodesenvolvimento e a fenótipos neuropsiquiátricos, e a atividade ou expressão aberrante do recetor tem sido estudada em cancros com envolvimento da via das neurotrofinas. Como um nó que integra sinais extracelulares de neurotrofinas com sinalização intracelular mediada por quinases, o TrkB é amplamente utilizado para investigar a comunicação entre vias, a conectividade neuronal e resultados de sinalização específicos do contexto em modelos celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais TrkB (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NTRK2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TrkB (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NTRK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TrkB. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NTRK2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.